(368) Impact of Gossypol on Cytotoxicity, Oxidative Stress, and Steroid Receptor Expression in Primary Smooth Muscle of Myometrium from Ovis Aries (PSMo24) cells.

Carolina R. Jiménez ^1* ; Daniela R. Pimenta ¹ ; Lívia M. Presuto ¹ ; Brenda L. A. da Silva ¹ ; Bruno S. Gatti ¹ ; João P. Duarte ¹ ; Patrícia S. Corrêa ¹ ; Hélder Louvandini ¹ ; Severino M. de Alencar ²

¹ Centro de energia nuclear na agricultura, Laboratório de Nutrição Animal, Universidade de São Paulo, SP, Brasil.

² Departamento de Indústria Agroalimentar, Alimentos e Nutrição, Laboratório de Cultura de Células, Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz, Universidade de São Paulo, SP, Brasil.

Abstract Text:

O objetivo foi avaliar os efeitos do gossipol na citotoxicidade, atividade antioxidante e expressão do receptor de esteroides em células primárias do músculo liso miometrial ovino (células PSM-Mo), visando elucidar seus potenciais efeitos na fisiologia e reprodução uterina. O caroço de algodão é um subproduto utilizado na alimentação animal, sendo uma rica fonte de proteínas, lipídios, fibras e minerais essenciais. Entretanto, seu uso deve ser monitorado devido à presença de gossipol, um polifenol bioativo que pode causar toxicidade sistêmica, estresse oxidativo e disfunção imunológica, impactando a saúde reprodutiva e hepática. Embora estudos em cordeiros tenham demonstrado que ele afeta a transcrição gênica e a morfologia testicular, bem como altera a dinâmica folicular e induz degeneração folicular, o impacto do gossipol na função uterina, particularmente em células PSM-Mo, ainda não foi investigado. Células PSM-Mo armazenadas em nitrogênio líquido (-196°C) das passagens II a V foram descongeladas e replantadas em frascos de cultura com meio Eagle modificado por Dulbecco e meio F-12 de Ham, suplementado com soro bovino fetal   e antibióticos, até que 80% de confluência fosse alcançada. A citotoxicidade foi avaliada usando o ensaio MTT (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio), com diferentes concentrações de gossipol (1–2000 µL). A capacidade antioxidante foi avaliada usando o ensaio 2', 7'-diclorodihidrofluoresceína diacetato (DCFH-DA) e o gerador de radicais 2-amino-2, 3-di-hidroxi-1, 4-naftoquinona (ABAP). A expressão do receptor de esteroides ( estrogênio e progesterona ) foi avaliada por RT-qPCR. O RNA total foi extraído usando Trizol®, e sua integridade foi verificada por espectrofotometria (Nanodrop) e eletroforese em gel de agarose. A transcrição reversa foi então realizada para síntese de cDNA, seguida de amplificação quantitativa por qPCR. A análise estatística foi realizada usando Análise de Variância (ANOVA) seguida pelo teste de Tukey para dados paramétricos e o teste de Kruskal-Wallis para dados não paramétricos, com p < 0,05 considerado significativo. Os gráficos foram gerados usando SigmaPlot 15.0.O ensaio MTT indicou que as células PSM-Mo exibiram uma resposta dependente da dose à suplementação de gossipol. Concentrações abaixo de 5 µL/mL não foram citotóxicas, enquanto concentrações ≥10 µL/mL induziram apoptose celular. As concentrações de gossipol (G-1 a G-5) não aumentaram a produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) e não diferiram do controle positivo (p > 0,05). Em contraste, a maior concentração testada (G-10) mostrou fluorescência reduzida, provavelmente devido aos efeitos citotóxicos observados no ensaio MTT, sugerindo uma diminuição nas células viáveis, o que pode indicar apoptose e supressão excessiva da sinalização redox. A análise da expressão dos receptores de estrogênio e progesterona em células PSM-Mo sugere que o gossipol em uma concentração de 10 µg/mL induziu a maior expressão de ambos os receptores, enquanto concentrações mais baixas não diferiram significativamente do controle (P > 0,05). Conclui-se que a dosagem de gossipol modulou a viabilidade celular, o equilíbrio oxidativo e a expressão do receptor de esteroides em células PSM-Mo. Concentrações ≥10 µg/mL induziram apoptose, enquanto doses entre 1–5 µg/mL preservaram a estabilidade oxidativa. Além disso, a expressão do receptor de esteroides foi maximizada em uma concentração de 10 µg/mL. Investigações em andamento do nosso grupo de pesquisa buscam aprofundar a compreensão dos mecanismos de ação do gossipol e seu impacto na função uterina.